SILENCIAMENTO GENÉTICO MEDIADO POR RNAi EM Rhynchophorus palmarum (L.)
controle comportamental, feromônio, expressão genética
A cultura do coqueiro (Cocos nucifera L.) tem relevância econômica em nível mundial, e o Brasil destaca-se como o sexto maior produtor. Entretanto, as palmeiras enfrentam ameaças devido à incidência de pragas, especialmente o coleóptero Rhynchophorus palmarum L., cujas larvas formam túneis no estipe ao se alimentarem dos tecidos internos, levando à morte da planta. O ataque se agrava, pois o adulto é vetor de agentes causadores de doenças letais nas palmeiras. Não há, no mercado, produtos viáveis e específicos para o controle populacional do besouro. A técnica de RNAi mostra-se uma alternativa promissora para o controle de pragas. Consistindo na introdução de RNA de fita dupla, capaz de silenciar genes da praga, promovendo um controle populacional específico, sem causar danos ambientais. O objetivo geral deste projeto é promover o silenciamento gênico em insetos da espécie R. palmarum, e os objetivos específicos são: realizar a extração e a anotação do transcriptoma da espécie; selecionar os genes-alvo para o silenciamento; produzir o dsRNA; testar a melhor técnica de entrega deste dsRNA ao inseto e avaliar seu potencial para uso em campo. Os insetos serão criados em laboratório. O RNA será extraído de larvas em dois instares, sendo realizado a anotação do transcriptoma e a escolha dos genes-alvo para o silenciamento, que serão amplificados por PCR e inseridos em Escherichia coli, as colônias transformadas serão sequenciadas para confirmar a inserção do gene correto, seguindo para a síntese do dsRNA in vitro, que será entregue de duas formas (injeção e ingestão), as larvas tratadas terão o RNA extraído para a comparação de expressão gênica. Além da expressão gênica, será avaliada a mortalidade após a exposição das larvas ao dsRNA. Espera-se que o silenciamento gênico em R. palmarum resulte em alterações na expressão gênica e na sobrevivência dos insetos, fornecendo subsídios para o desenvolvimento futuro de estratégias de controle específicas.