PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E AVALIAÇÃO DE ATIVIDADE ANTIFÚNGICA E ANTIGLIOBLASTOMA
DE UMA LECTINA DE FOLHAS DE Jatropha multifida L. (MALPIGHIALES: EUPHORBIACEAE)
Merthiolate; planta medicinal; hemaglutinação; proteína; atividade antimicrobiana; antiglioblastoma.
Jatropha multifida, conhecida popularmente pelos nomes de merthiolate, flor-de-coral, coral, coral-dos-jardins, flor-de- sangue, é uma planta cultivada na América do Sul, no sul da China e na África, sendo também encontrada em Alagoas. Diversos tecidos da planta são utilizados na medicina popular como cicatrizante, para o tratamento da candidíase oral, gonorreia, febre, artrite, feridas e infecções. Lectinas são proteínas capazes de se ligar a carboidratos, podendo exercer diversas atividades biológicas tais como antimicrobiana, inseticida, antitumoral e imunomoduladora. O presente estudo teve como objetivo a purificação, a caracterização, avaliação da atividade antimicrobiana e antiglioblastoma de uma lectina extraída das folhas secas de J. multifida. Proteínas foram extraídas do pó das folhas através de homogeneização (16 h, 4 oC) em tampão Tris-HCl 50 mM pH 8,0, apresentando atividade hemaglutinante específica (AHE: 162,44). O extrato obtido foi tratado com sulfato de amônio em diferentes concentrações (0-20%, 20-40%, 40-60% e 60-80%) para fracionamento proteico e a fração 0-20% foi a única que apresentou AHE (556,98). A fração 0-20% foi submetida à cromatografia em coluna de quitina equilibrada com Tris-HCl 50 mM pH 8,0. Frações de 2 mL foram coletadas e avaliadas quanto a absorbância a 280 nm e AH. O pico protéico ativo obtido com o eluente ácido acético 0,5 M foi reunido e dialisado contra Tris HCl 50 mM pH 8,0 por 6 horas. Para verificar o grau de pureza da lectina e determinar a massa molecular aparente, a amostra foi analisada por método eletroforético em gel de poliacrilamida a 10% sob condições desnaturantes, utilizando dodecilsulfato de sódio, e na presença e ausência de agente redutor, onde foi possível a visualização de uma banda proteica de massa molecular aparente de 56 kDa em condição não-redutora e redutora. Portanto, uma lectina de folhas de J. multifida (JamuLL) foi isolada através de um único passo cromatográfico em quantidades miligramas (2,5 mg; AHE: 10.240). A dosagem de proteínas e de fenóis foi feita em todas as etapas da purificação, mostrando que o procedimento de purificação removeu fenóis encontrados no extrato e fração. A caracterização da lectina mostrou que ela possui atividade hemaglutinante parcialmente inibida por caseína, mas que não é afetada por íons divalentes (Ca2+ e Mg2+) nem pela presença de EDTA. JamuLL é classificada como uma lectina termoestável, pois se manteve ativa entre as temperaturas de 30 °C a 100 °C durante 60 minutos, bem como entre a faixa de pH 5,0 a 8,0, apresentando melhor atividade nos valores de pH ácidos. JamuLL inibiu o crescimento de Candida albicans, C. glabrata, C. krusei, C. tropicalis e Cryptococcus neoformans com concentração mínima inibitória (CMI) entre 35 μg/mL e 17,5 μg/mL e inibiu a formação de biofilme de C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei, C. tropicalis e C. neoformans, mas não foi ativa sobre C. parapsilosis e todas as bactérias testadas. Também apresentou potencial citotóxico contra células de glioblastoma humano. Em conclusão, JamuLL é uma molécula com potencial para tratamento de infecções fúngicas e antiglioblastoma.