Desenvolvimento de tecnologias para detecção de fosfatase ácida em amostras biológicas
Biomarcadores enzimáticos; identificação de sêmen; detecção colorimétrica; testes forenses; PAD;
Nas ciências forenses, a detecção e avaliação de marcadores biológicos são essenciais para elucidação de crimes. Nesse contexto, a enzima fosfatase ácida (FA) destaca-se como um importante marcador presente em amostras de fluido seminal. Este trabalho descreve o desenvolvimento de um método colorimétrico para detecção de FA, empregando como substrato o ácido ascórbico 2-fosfato (AAP) que, na presença da enzima,é hidrolisado em pH 5,0, liberando fosfato inorgânico e o ácido ascórbico reduzido (AAr), utilizado como espécie indicadora. A primeira etapa consistiu no uso do reagente sal nitroso-R (1-nitroso-2-hidroxinaftaleno3,6-dissulfonato dissódico, NRS) (λmax = 710 nm), que proporciona maior precisão na detecção colorimétrica, minimizando possíveis interferências causadas pela coloração natural das amostras. O uso do reagente NRS destaca-se por ser simples, de baixo custo, estável e amplamente disponível. O método apresentou desempenho analítico aprimorado para a detecção de FA em uma faixa linear de 0,25 a 3,0 U L-1, com um limite de detecção (LOD) de 0,08 U L-1. Enquanto, a segunda etapa, utilizou o dispositivo analítico baseado em papel (PAD) permitindo o monitoramento da intensidade da cor com volume de 0,5 μL da amostra, com faixa linear de 2,5 a 25 U L-1 e LOD = 0,83 U L-1. Dessa forma, os procedimentos propostos possibilitaram análises qualitativas e quantitativas rápidas e seletivas, podendo ser aplicadas em campo ou em laboratório, reduzindo a possibilidade de resultados falso-positivos.