Desenvolvimento de metodologias analíticas para detecção da mastite bovina em amostras de leite.
Mastite bovina; inflamação; células somáticas; sonda colorimétrica; ácido nucleico.
No Brasil, a atividade de bovinocultura leiteira é de grande importância econômica, o que gera preocupação com a qualidade do leite e de seus derivados. A mastite, caracteriza-se como um processo infeccioso na glândula mamária da vaca, que pode provocar o descarte do leite, diminuição de sua qualidade e redução na produção, além de fácil proliferação. As metodologias de referência para sua detecção possuem baixa precisão, requerem instrumentação específica e profissional dedicado, e são manuais. Neste cenário, o desenvolvimento de novos métodos seletivos, simples e portáteis é necessário. Assim, visando à detecção da mastite bovina, foi aplicada sonda colorimétrica seletiva a DNA, desenvolvida por nosso grupo de pesquisa. O método baseou-se no aumento da concentração de células somáticas no leite contaminado por mastite, as quais, na presença de um surfactante, liberam DNA na solução; este, ao interagir com a sonda, provoca uma variação de cor, permitindo a identificação dessa infecção. Os melhores resultados foram observados com a sonda a 2,5 µM, tamponada em citrato 50 mM (pH 6), utilizando o lauril sulfato de sódio (SDS) a 2% (m/v) como surfactante, com diluição final do leite em 1000×. Observou-se que, em geral, há duas bandas de absorção, uma em 450 nm e outra em 520 nm. A banda em 450 nm, refere-se aos sistemas com SDS, mas sem a presença de DNA (ou em baixa concentração, não infectado), enquanto a banda em 520 nm refere-se à formação de um complexo supramolecular colorido entre a sonda e o DNA no meio (alta concentração de DNA, infectado). Desta forma, utilizou-se como critério de decisão a razão entre as absorções em 520 e 450 nm (A520/A450). As amostras de leite foram obtidas da Fazenda Lagoas da Jurema (Major Isidoro, AL). Inicialmente, as amostras foram analisadas pelo teste de referência (California Mastitis Test, CMT) para uma classificação inequívoca. Em seguida, o método desenvolvido foi aplicado. Após análise e tratamento matemático de amostras reais, nota-se que, de modo geral, as amostras infectadas apresentam razão (A520/A450) maior que 1, enquanto as não infectadas apresentam valores significativamente menores. Houve concordância total entre os resultados do CMT e do método proposto. Aplicando o teste t de Student, observou-se diferença significativa entre as amostras infectadas e não infectadas, com ponto de corte na razão de 0,92, o que indica que as amostras são passíveis de diferenciação pelo método proposto. Além disso, ao utilizar o tratamento ROC, observou-se a ausência de falsos positivos e falsos negativos, o que demonstra a exatidão da técnica. Dessa forma, o método desenvolvido mostrou-se adequado para a detecção de mastite bovina e passível de implementação em larga escala.