Vírus Chikungunya; sinoviócitos semelhantes a fibroblastos; miRNAs; vesículas extracelulares.

O vírus Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus transmitido por mosquitos do gênero Aedes, causando a febre Chikungunya (CHIKF), que afeta articulações sinoviais e pode evoluir para a síndrome reumática crônica (SRC). A sinóvia é composta por diversos tipos celulares, destacando-se os sinoviócitos semelhantes a fibroblastos (FLS), importantes na inflamação e manutenção da homeostase sinovial. Alterações epigenéticas, como a regulação da expressão gênica por microRNAs (miRNAs), desempenham papel relevante nesse contexto. Os miRNAs participam de diversos processos biológicos e podem ser transportados por vesículas extracelulares (EVs) envolvidas na comunicação intercelular. Embora o CHIKV induza processos artritogênicos, os mecanismos moleculares envolvidos ainda são pouco compreendidos. Sendo assim, este trabalho tem como hipótese que a infecção pelo CHIKV modula a expressão de miRNAs presentes em EVs de HFLS (Human Fibroblast-Like Synoviocytes). Para testar essa hipótese, HFLS foram infectados in vitro com CHIKV, e as EVs presentes no sobrenadante foram isoladas. Foi realizada a caracterização das EVs por análise de rastreamento de partículas (NTA), determinando seu tamanho e concentração, e por microscopia crioeletrônica (crio-EM), para avaliação morfológica. O RNA total foi extraído das EVs, quantificado por fluorimetria e analisado por RT-qPCR OpenArray. Também foi realizada uma RT-qPCR para quantificação de RNA viral (vRNA) nas EVs. A análise dos dados considerou miRNAs diferencialmente expressos (DE’s) (p ≤ 0,05). Seus alvos validados foram obtidos via miRTarBase e, com auxílio das ferramentas Cytoscape, ClueGO e WebGestalt, foram construídas redes de interação miRNA-alvo e mapeadas vias celulares associadas. Como resultados, foi observado uma maior concentração de RNA total em EVs de células infectadas, assim como a presença de vRNA. O tamanho médio das EVs secretadas foi de 223,4 nm no controle negativo e 274,5 nm nos HFLS infectados. Foram identificados 239 miRNAs expressos nas EVs, sendo que 30 deles foram DE’s. Um total de 268 genes alvos foram encontrados na miRTarBase, sendo 170 alvos de miRNAs upregulated e 122 alvos de miRNAs downregulated. A rede de interação demonstrou 188 interações entre miRNAs upregulated e seus alvos e 131 interações entre miRNAs downregulated e seus alvos. Diferentes vias celulares relacionadas a infecção pelo CHIKV, como a via das MAPKs, via de regulação da actina do citoesqueleto, via PI3K-Akt, via da osteoclastogênese, entre outras, foram identificadas. Diante disto é possível concluir que EVs com diferentes tamanhos e morfologias são secretadas pelos HFLS e que a infecção pelo CHIKV altera o perfil de expressão de miRNAs, impactando em diferentes genes e vias celulares. Etapas futuras do projeto incluem validações in vitro dos dados obtidos até então.