Síntese, caracterização e aplicação de quantum dots de CdTe como nanosondas fluorescentes para aplicações bioanalíticas: determinação de proteínas catiônicas e tripsina
Os pontos quânticos (quantum dots, QD) são nanopartículas fluorescentes constituídas por materiais semicondutores inorgânicos, medindo entre 1 a 10 nM e apresentando características intermediárias entre os materiais macroscópicos que os constituem e os átomos e/ou moléculas, o que lhes conferem alta versatilidade e propriedades ímpares, tais como como elevado rendimento quântico, alta estabilidade, largo espectro de absorção e emissão e baixa toxidade. Neste sentido, os QD têm sido explorados e aplicados em diferentes áreas da ciência. Visando a determinação de protamina (PT) foi sintetizado quantum dots de CdTe funcionalizados com ácido mercaptosuccínico (pKa1 = 3,30 e pKa2 = 4,60). O método se baseia na supressão da fluorescência do QD (carga negativa) na presença da protamina (proteína catiônica), devido a formação de agregados do nanomaterial, gerando um sistema ON-OFF. O método proposto obteve melhores resultados com o QD-CdTe1h a 500 nM em tampão succinato 25 mM pH 5. A força iônica interfere no meio até 50 mM, seguido da estabilização da sensibilidade. O QD sintetizado apresentou fotoestabilidade por até 2 h com exposição continua de radiação. Nas condições otimizadas, obteve-se uma faixa linear de 0,05-0,5 mg L-1 (10 -100 nM), LOD de 0.035 mg L-1 (7 nM) e RSD 4,2%. Quando aplicado a amostras de urina e medicamento sintético, o método apresentou recuperações entre 96 a 108%. Além disso, foi explorada a composição da protamina, a qual é rica em arginina, para a quantificação da tripsina, uma enzima com clivagem específica nos aminoácidos lisina e arginina, através de um sistema ON-OFF-ON e de um sistema bioconjugado. Nesse sistema, após a agregação do QD com a protamina, a adição da tripsina provoca a clivagem da protamina e há liberação do quantum dot, levando ao aumento da fluorescência de forma proporcional a concentração de enzima. Para esse método, os melhores resultados foram obtidos com QD-CdTe6h a 100 nM e protamina a 2 mg L-1 , em tampão amônio a 75 mM (pH 8,5). A força iônica interferir no método até 100 mM. O tempo de espera de reação para a realização das análises foi de 60 min e tanto o QD como o sistema QD-PT apresentaram fotoestabilidade por até 2 h com exposição continua de radiação. Nas condições otimizadas, o sistema apresentou uma faixa linear de 0,005 a 0,06 mg L-1 (0,22 - 2,61 nM), limite de detecção equivalente a 0,0014 mg L-1 (0,06 nM) e RSD 2,7. A determinação de tripsina foi realizada em amostras de urina
quantum dots, CdTe, fluorescência molecular, protamina, tripsina