Banca de QUALIFICAÇÃO: BEATRIZ DO NASCIMENTO OLIVEIRA

Uma banca de QUALIFICAÇÃO de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : BEATRIZ DO NASCIMENTO OLIVEIRA
DATA : 03/04/2023
HORA: 09:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Desenvolvimento de método colorimétrico para determinação da fosfatase ácida visando aplicações forenses

PALAVRAS-CHAVES:

Crimes sexuais; Sêmen; Fosfatase ácida; Detecção colorimétrica; Química forense.

PÁGINAS: 60
RESUMO:

Crimes sexuais são aqueles que atentam contra a dignidade e liberdade sexual, caracterizados como uma forma de violência de maior incidência ao gênero feminino. Desta forma, a identificação de fluidos biológicos como sangue, saliva e sêmen constitui uma das etapas cruciais na análise de cenas de crime ou em amostras para perícia. Neste sentido, a presença de fluido seminal (sêmen) na vítima ou em roupas, por exemplo, pode constitui uma evidência criminal. O sêmen possui uma composição complexa, contudo, a enzima fosfatase ácida (AP) pode ser empregada como um marcador, uma vez que possui concentrações no líquido seminal até 400 vezes maior comparada a outros fluidos corporais. O objetivo é desenvolver uma metodologia com detecção colorimétrica que use pequena quantidade de amostra, seja passível de ser usado em campo, com resposta rápida e seletiva, assim, auxiliando na confirmação de evidências criminais. O método proposto se baseia na detecção da FA empregando como substrato o ácido ascórbico 2-fosfato (AAP), o qual, na presença da enzima libera fosfato inorgânico e o ácido ascórbico reduzido (AAr) em pH 5,0, sendo este, usado para detectar a enzima no meio. Neste caso, o AAr reage com os íons Fe(III) levando a formação de Fe(II) e ácido ascórbico oxidado (AAo). Portanto, foi explorada a reação dos íons Fe(II) gerados in situ com K3[Fe(CN)6] em meio ácido levando a formação do azul da Prússia (AZP, Fe4[Fe(CN)6]3), um coloide azul escuro (λ = 710 nm). O uso do AZP como sonda colorimétrica com λmax > 500 nm evita possíveis interferências espectrais em função da composição de amostras complexas. Inicialmente, os principais parâmetros reacionais foram otimizados empregando AAr, nas condições de melhor performance analítica usou-se Fe(III) 0,17 mM, K3Fe(CN)6 1,7 mM, ambos em HNO3 0,4 M. Para melhorar a estabilidade do TB gerado empregou-se a polivinilpirrolidona (PVP) 0,20% (m/v). Visando simplificar o método, verificou-se que não existe diferença estatística (95% de confiança) entre as curvas analíticas para AAr (5 a 40 µM) adicionando-se os reagentes separadamente ou como mistura única [Fe(III) + K3Fe(CN)6 + PVP]. Em seguida, a aplicou-se as condições otimizadas na detecção de FA, usando AAP (0.75 mU) como substrato a pH 5,0 (HAc/NaAc, 100 mM). Nestas condições, se obteve uma curva analítica para AP, com faixa linear de 0,50 a 3,0 U L-1, correspondente a equação A710 nm = 0.32×CAP + 0,016 (n = 8, r = 0,9964) e LOD = 0,004 U L-1. Como prova de conceito, o método foi aplicado com êxito em uma amostra de sêmen real (CAAE: 58121322.7.0000.5013) em uma avaliação qualitativa após diluição do sêmen em solução, aplicado na superfície de um tecido (algodão), swab e no dispositivo de papel. Por fim, o método proposto mostrou-se passível de ser aplicando em diferentes situações, com resposta até 20 min, sendo uma alternativa viável para aplicações em campo, e contribuindo para uma tomada rápida de decisão quando necessário.

MEMBROS DA BANCA:
Externo(a) à Instituição - Maria do Carmo Hespanhol
Interno(a) - 1869296 - CINTYA D'ANGELES DO ESPIRITO SANTO BARBOSA
Presidente - 1613338 - JOSUE CARINHANHA CALDAS SANTOS
Externo(a) à Instituição - RODOLFO DE MELO MAGALHÃES SANTANA