Banca de DEFESA: BEATRIZ DO NASCIMENTO OLIVEIRA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : BEATRIZ DO NASCIMENTO OLIVEIRA
DATA : 27/07/2023
HORA: 09:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

Desenvolvimento de método colorimétrico para detecção da fosfatase ácida visando aplicações forenses.

PALAVRAS-CHAVES:

Crimes sexuais; Sêmen; Fosfatase ácida; Detecção colorimétrica; Química forense.

PÁGINAS: 80
RESUMO:

Crimes sexuais são aqueles que atentam contra a dignidade e liberdade sexual, caracterizados como uma forma de violência de maior incidência ao gênero feminino. Desta forma, a identificação de fluidos biológicos como sangue, saliva e sêmen constitui uma das etapas cruciais na análise de cenas de crime ou em amostras para perícia. A presença de fluido seminal (sêmen) na vítima ou em roupas, por exemplo, pode constituir uma evidência criminal. O sêmen possui uma composição complexa, contudo, a enzima fosfatase ácida (AP) pode ser empregada como um marcador, uma vez que possui concentrações no líquido seminal até 400 vezes maior comparada a outros fluidos corporais. Neste sentido, o objetivo é desenvolver uma metodologia com detecção colorimétrica da AP utilizando uma pequena quantidade de amostra, sendo passível de ser usada em campo, com resposta rápida e seletiva, assim, auxiliando na confirmação de evidências de crimes sexuais. O método proposto se baseia na detecção da AP empregando como substrato o ácido ascórbico 2- fosfato (AAP), o qual, na presença da enzima libera fosfato inorgânico e o ácido ascórbico reduzido (AAr) em pH 5,0, sendo este, usado para detectar a enzima no meio. Neste caso, o AAr reage com os íons Fe(III) levando a formação de Fe(II) e ácido ascórbico oxidado (AAo). Portanto, foi explorada a reação dos íons Fe(II) gerados in situ com K3[Fe(CN)6] em meio ácido levando a formação do azul da Prússia (PB) (Fe4[Fe(CN)6]3), um coloide azul escuro (λ = 710 nm). O uso do PB como sonda colorimétrica com λmax > 500 nm evita possíveis interferências espectrais em função da composição de amostras complexas. Inicialmente, os principais parâmetros reacionais foram otimizados empregando AAr, nas condições de melhor performance analítica usou-se Fe(III) a 1,5 µM e K3Fe(CN)6 a 1,5 mM, ambos em HNO3 0,45 M. Para melhorar a estabilidade do PB gerado empregou-se a polivinilpirrolidona (PVP) 0,20% (m/v). Em seguida, aplicou-se as condições otimizadas na detecção de AP, usando AAP (0,75 mM) como substrato a pH 5,0 (HAc/NaAc, 100 mM). Nestas condições, se obteve uma curva analítica para AP, com faixa linear de 0,50 a 3,0 U L -1 , correspondente a equação A710 nm = 0,32×CAP + 0,016 (n = 8, r = 0,9964) e LOD = 0,004 U L-1 , aguardando um tempo de 45 minutos. Como prova de conceito, o método foi aplicado com êxito em uma amostra de sêmen real (CAAE: 58121322.7.0000.5013) para uma avaliação qualitativa após diluição do sêmen em solução, aplicado na superfície de um tecido (algodão), swab e no dispositivo analítico baseado em papel (PAD), entre as análises o PAD apresentou melhor condição uma vez que foi possível monitorar a intensidade da cor utilizando o volume de 0,5 µL da amostra. Além disso, o método foi avaliado com os possíveis interferentes como saliva, sangue, urina, lubrificante, clara de ovo, molho de tomate, suco de abacaxi e leite, para esse teste o molho de tomate apresentou os valores mais próximos da amostra seminal, devido ao tomate ser rico em ácido ascórbico. Por fim, o método proposto mostrou-se passível de ser aplicado em diferentes situações, incluindo uma dupla resposta do sistema em relação a enzima de fosfatase ácida bem como o ácido ascórbico reduzido, sendo uma alternativa viável para aplicações em campo, e contribuindo para uma tomada rápida de decisão quando necessário.

MEMBROS DA BANCA:
Externo(a) à Instituição - JOSÉ LUIZ DA COSTA
Interno(a) - 1869296 - CINTYA D'ANGELES DO ESPIRITO SANTO BARBOSA
Presidente - 1613338 - JOSUE CARINHANHA CALDAS SANTOS