Banca de DEFESA: MONIZY DA COSTA SILVA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : MONIZY DA COSTA SILVA
DATA : 30/10/2023
HORA: 14:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO:

PRODUÇÃO, PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E APLICAÇÕES DE UMA NOVA PROTEASE E UMA ENDOGLUCANASE DO FUNGO Pleurotus djamor PLO13

PALAVRAS-CHAVES:

Enzimas hidrolases; Fermentação em estado sólido; Purificação; Aplicações biotecnológicas

PÁGINAS: 168
RESUMO:

A agricultura brasileira, impulsionada por avanços tecnológicos e preocupações ambientais, está se tornando um importante motor de desenvolvimento. Pesquisas estão sendo realizadas para aproveitar matérias-primas não comerciais, como biomassa lignocelulósica, para produzir enzimas úteis por meio da fermentação em estado sólido (FES) com fungos, como o Pleurotus djamor PLO13. Duas dessas enzimas, proteases e endoglucanases, têm aplicações em diversas indústrias e são amplamente produzidas globalmente. Diante disso, a presente pesquisa tem como objetivo produzir, purificar, caracterizar e avaliar possíveis aplicações biotecnológicas das enzimas protease e endoglucanase oriunda do processo de fermentação de estado sólido com o fungo P. djamor PLO13. Inicialmente, foi realizado um screening de quatro resíduos agroindustriais (BCA, FC, CA e FT) como suporte para o crescimento do fungo, e o FT demonstrou ser o mais eficiente após 120 horas de cultivo. Posteriormente, foram realizados ensaios enzimáticos para analisar a presença de protease e endoglucanase no extrato, e ambas foram detectadas. O extrato enzimático bruto alcançou sua máxima atividade caseinolítica após 120 horas de cultivo. A especificidade da protease foi analisada em relação aos substratos testados e sua inibição na presença de inibidores específicos, o que permitiu classificá-la como uma serinoprotease semelhante à elastase-2-like dependente de íons metálicos, com uma atividade específica de 3.976 U.mg−1. Essa enzima demonstrou alta eficiência na coagulação do leite integral pasteurizado e desnatado reconstituído, tanto na presença quanto na ausência de cálcio, mesmo em temperatura ambiente. O processo de coagulação foi influenciado por fatores como temperatura, tempo e concentração de cálcio, que foram minuciosamente analisados. Quanto à endoglucanase presente no extrato bruto, ela foi classificada como halotolerante e halofílica e apresentou temperatura e pH ótimo de 50 °C e de 5,0, respectivamente. Além disso, manteve-se estável nas condições de 40 a 60 °C e pH 4,0 a 10,0, bem como na presença de agentes surfactantes, como SDS, triton X-100, Tween 40 e Tween 80. Sua atividade enzimática foi ativada na presença de EDTA, Na + , etanol, propanona, diclorometano, dinitrometano, ureia e β-mercaptoetanol, enquanto Mg2+, Ca2+ e Cu2+, metanol e heptano a reduziram ou inativaram. Para a purificação da endoglucanase, empregou-se um processo de fracionamento orgânico seguido de cromatografia de troca aniônica. Durante esse processo, foi purificado uma enzima com massa molecular de aproximadamente 26 kDa e que apresentou uma notável recuperação de 110%. A endoglucanase pura apresentou um ótimo desempenho em termos de temperatura e pH, com valores ótimos de 50 °C e 5,0, respectivamente. Além disso, ela mostrou-se estável em uma ampla faixa de temperatura, variando de 30 a 70 °C, e pH, variando de 3,0 a 10,0. Essa notável estabilidade em condições variáveis a torna especialmente valiosa em processos industriais e foi classificada como halotolerante e halofílica. Ademais, a atividade enzimática foi ativada pela presença de EDTA e Mn2+, enquanto a presença de Mg2+ inibiu sua atividade. Em termos de cinética enzimática, a enzima exibiu um Km de 0,0997 ± 0,0063 mg/ml e um Vmax de 0,1122 ± 0,00109 mol/min/mL, indicando sua eficácia na hidrólise de substratos específicos. Esses resultados indicam um alto potencial de aplicação industrial para essas enzimas, especialmente nos setores de laticínios, produção de etanol de segunda geração e fabricação de detergentes, devido à sua estabilidade sob uma ampla gama de condições.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1811274 - HUGO JUAREZ VIEIRA PEREIRA
Interno(a) - 2089586 - FRANCIS SOARES GOMES
Interno(a) - 1294906 - RUTH RUFINO DO NASCIMENTO
Externo(a) ao Programa - 1488396 - TICIANO GOMES DO NASCIMENTO - UFALExterno(a) à Instituição - ALDENIR FEITOSA DOS SANTOS - UNEAL