Produção, isolamento e caracterização de lacase-simile e caseinase de Amphobotrys ricini obtidas por fermentação em estado sólido
A espécie Amphobotrys ricini é um fungo filamentoso ascomiceto que é bastante disseminado em diferentes regiões do Brasil. É um fungo que possui crescimento saprofítico e fitopatogênico, sendo muito importante economicamente pela capacidade destrutiva ao produzir o mofo cinzento nos cultivares de mamoneira. Embora bastante estudado nas relações que possui com seu hospedeiro preferencial e sabendo-se da presença de atividades de lipases, proteases, pectinases, celulases, maltases, superóxido dismultases e esterases, apenas uma enzima endoglucanase foi estudada de forma mais detalhada, sendo isolada e caracterizada. Para conhecer quais atividades o fungo apresenta, o A. ricini foi induzido em placa de petri na produção de enzimas lignolíticas e o inóculo foi aplicado sobre resíduos de cana, trigo, coco e madeira. Apresentou crescimento mais acentuado sobre resíduo de cana, onde produziu de forma relevante enzimas com atividade lacase-símile, enzima que foi parcialmente isolada através de rota composta por extração ácida com quelante, fracionamento salino, diálise e cromatrografia por troca iónica. Uma outra rota se destaca como rota de pré-purificação a partir de uma extração em pH básico e subsequente aplicação em sistema trifásico, apresentando maior recuperação que a primeira rota, tornando-se promissora como rota alternativa de isolamento. O A. ricini também apresentou crescimento relevante sobre resíduo de trigo, apresentando grande atividade caseinolítica e de formação de coágulo de caseína em leite bovino reconstiuído. A extração dessa atividade enzimática foi executada com quelante em meio ácido e em meio básico sem quelantes, onde esta última se destaca como condição mais favorável, apresentando uma rota de pré-purificação promissora que consiste sem submeter a extração a um sistema aquoso bifásico com maiores recuperações que os sistemas trifásicos e o fracionamento salino. Não foram detectadas atividades de outras ligninases. A atividade caseinolítica foi inibida completamente por PMSF, indicando que a enzima responsável é uma serina protease. No extrato com atividade proteolítica foram detectadas baixas taxas de atividade de tripsina, quimotripsina e elastase-2. A protease se coloca como uma enzima promissora na fabricação de laticínios e a lacase-símile parcialmente isolada é uma enzima com potencial de aplicação em diferentes campos.
Amphobotrys ricini. Lacase. Serina-protease. Caseinase. Isolamento. Caracterização.