Banca de QUALIFICAÇÃO: EDSON FERREIRA DA SILVA



Uma banca de QUALIFICAÇÃO DE MESTRADO foi cadastrada pelo programa.

DISCENTE: EDSON FERREIRA DA SILVA
DATA: 29/09/2020
HORA: 14:00
LOCAL: Plataforma de webconferência
TÍTULO:

COMPARAÇÃO DE TÉCNICAS PARA PURIFICAÇÃO DE LACTOFERRINA DE BUBALINOS E AVALIAÇÃO DE SUA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA


RESUMO:

A lactoferrina (Lf) é uma glicoproteína com massa molecular de cerca de 80 kDa. Essa enzima pertence à família das transferrina que tem uma habilidade específica de realizar ligação com o íon ferro. A estrutura molecular da LF é composta de uma única cadeia polipeptídica e cerca de 690 resíduos de aminoácidos. A Lf pode ser encontrada em várias secreções mucosas, como lágrimas, saliva, fluidos gastrointestinais, urina e fluido seminal e nos grânulos secundários de neutrófilos, sendo liberadas em locais onde há uma resposta inflamatória. A Lf é considerada uma proteína multifuncional, desempenhando vários papéis biológicos, tais como atividades antibacterianas, antivirais, antifúngicas, anti-inflamatórias, antitumorais, antioxidantes e imunomoduladoras. Este trabalho teve o objetivo de comparar os métodos de purificação. Empregar distintas técnicas de purificação de lactoferrina-Lf presente no leite de bubalinos, monitorando a purificação por técnicas fluorimétricas e avaliar propriedades antimicrobiana da Lf purificada. o processamento do leite de búfala iniciou-se com a separação da gordura por centrifugação. O leite desnatado foi acidificado com HCl 0,1 M até o pH 4.6 obtendo o soro acidificado. Nessa etapa ocorre a subdivisão do processamento para o soro ácido em dois processos distinto o processamento do soro ácido para a purificação por cromatografia e o processamento do soro ácido para isolamento pelo ponto isoelétrico da lactoferrina. No protocolo de purificação por cromatografia líquida o soro ácido foi neutralizado com NaOH até o pH 6.8 e o sobrenadante obtido por centrifugação foi submetido a precipitação salina nos perfis de 0-20%,020-40%, 40-60% e 60-80% de saturação de (NH4)2SO4. As análises fluorimétricas das frações salinas foram realizadas em comprimento de excitação a 290 nm e comprimentos de onda de emissão entre 300-550 nm. O perfil salino do precipitado ressuspendido 40-60% apresentou o espectro de extinção de fluorescência característico da lactoferrina. O precipitado ressuspendido 40-60% foi aplicado a cromatografia líquida em gel filtração Sephacryl S-100 e as frações 12 a 16 apresentaram o espectro de extinção de fluorescência característico da lactoferrina. A eletroforese SDS-PAGE à 8% obteve uma melhor resolução carga/massa das bandas marcadas pelo corante, que mostra a presença de duas entidades proteicas na fração LfB e a fração LfS obteve uma entidade proteica no gel SDS-PAGE à 8%. A purificação por titulometria do pI da lactoferrina o soro ácido foi titulado até pH 5.2 com NaOH 1 M, o sobrenadante obtido por centrifugação foi titulado até o pH 8.3 e centrifugado. As amostras dos sobrenadantes e precipitados ressuspendidos foram submetidas a quantificação do teor de proteínas pelo método de Bradford e realizados os estudos fluorimétricos e eletroforético. o precipitado ressuspendido a pH 8.3 obteve o espectro de extinção de fluorescência característico da lactoferrina. A eletroforese SDS-PAGE 9% apresentou presença de bandas de entidades todas as frações quando comparadas com a lactoferrina comercial. O estudo mostrou o isolamento e purificação de lactoferrina bubalina por dois métodos distintos e o monitoramento por fluorimetria endo o processo de purificação da lactoferrina bubalina.


PALAVRAS-CHAVE:

Lactoferrina, Cromatografia líquida, Ponto isoelétrico


PÁGINAS: 94
GRANDE ÁREA: Ciências Exatas e da Terra
ÁREA: Química

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 426640 - FABIANE CAXICO DE ABREU GALDINO
Externo(a) ao Programa - 2089586 - FRANCIS SOARES GOMES
Externo(a) ao Programa - 1811274 - HUGO JUAREZ VIEIRA PEREIRA
Externo(a) ao Programa - 3074103 - JOSE MARIA RODRIGUES DA LUZ
Externo(a) ao Programa - 1121008 - SONIA SALGUEIRO MACHADO
Notícia cadastrada em: 24/09/2020 11:01
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