Leveduras dominantes. Cinética de crescimento. Fermentação Alcoólica. Análise Molecular. Produção de Etanol.

Leveduras dominantes são frequentemente isoladas de destilarias e, portanto, são altamente adaptáveis, resistentes ao etanol e contaminantes. Por isso, têm sido cada vez mais utilizadas em processos de fermentação, no entanto, sua permanência ao longo da safra é frequentemente questionada. O presente trabalho teve como objetivo o estudo das leveduras predominantes num período que compreendeu os últimos dez dias de safra. As colônias de levedura para a seleção foram obtidas da usina Santa Clotilde (Rio Largo, Alagoas) durante os últimos dez dias da safra 2023/2024. Foram duas dornas por dia, e de cada dorna uma amostra do início da fermentação (1 a 2 horas) e outra no final da fermentação (após 8 horas). Para atestar a viabilidade das amostras, verificou-se o Brix, pH e viabilidade celular das amostras coletadas. A diversidade macro morfológica foi constatada por plaqueamento em superfície com meio WLN, e as colônias predominantes foram isoladas por amostra, totalizando 40 estirpes. Após reativação, algumas cepas não puderam ser recuperadas, restando 35 colônias isoladas. O plaqueamento em meio Nagai foi utilizado para a identificação de mutantes respiratórios ou morfológicos. O DNA das 35 colônias predominantes foi extraído, e as mesmas foram avaliadas através de reação de PCR com os primers NL1 e NL4, que amplificam a região D1/D2 do gene 26S, região conservada e utilizada para sequenciamento genético. Paralelamente, buscou-se identificar as variações moleculares e metabólicas das leveduras predominantes, observando a permanência ou substituição da cepa personalizada introduzida no início da safra e se os efeitos das condições estressantes do final de safra resultaram em alguma variação molecular passível de identificação por meio dos oligonucleotídeos Delta 12 e Delta 21, EL1, YLL021WR YLL021WF e (GTG)5. Foi realizado o teste com tubos múltiplos para avaliar a capacidade fermentativa com mostos de melaço (MM15), caldo de cana (MCC12) e sacarose (YPSac10), em comparação com a cepa referência CAT-1 e com o fermento introduzido no início da safra (injeção), e 6 morfotipos apresentaram melhores resultados. Uma avaliação cinética foi realizada e a taxa de crescimento específico celular foi determinada por medição de absorbância. As análises incluíram a caracterização morfológica, ensaios de PCR para tipificação molecular e sequenciamento, medições cinéticas de crescimento e estudos físico-químicos e uma fermentação com as estirpes selecionadas para avaliação da produção de etanol, consumo de açúcares, entre outros. Os resultados esperados envolveram a otimização do processo de produção de etanol, possibilitando maior eficiência e sustentabilidade.