Banca de DEFESA: ERIVALDO DAVI DOS SANTOS JUNIOR

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : ERIVALDO DAVI DOS SANTOS JUNIOR
DATA : 15/11/2021
HORA: 09:00
LOCAL: Sala 19
TÍTULO:

Nanosistema baseado em hidróxido duplo lamelar para inibição de microRNAs:
caracterização da toxicidade e da eficiência de inibição.

PALAVRAS-CHAVES:

Hidróxidos Duplos Lamelares; microRNAs; Ensaio Funcional; Epilepsia.

PÁGINAS: 50
RESUMO:

Introdução: A Epilepsia do Lobo Temporal (ELT) é a mais comum das epilepsias e 30% dos pacientes não apresentam remissão completa das crises mesmo com o uso de drogas antiepilépticas (DAE’s). Assim, há a necessidade de se buscar novas abordagens terapêuticas, a exemplo da modulação funcional de miRNAs (miRs) por meio de abordagem farmacológica (MIMIC / inibidores de miRs). Nanopartículas baseadas em Hidróxidos Duplos Lamelares (HDL) têm sido usadas como carreadores de siRNA, entretanto, a aplicação de HDL para a entrega de inibidores de miRs ainda requer investigação. Objetivo: Nesse trabalho, produzimos e testamos um
nanocarreador baseado em Mg-Al-LDH complexado com inibidor de miRs contra miR-196b-5p. Metodologia: os HDLs foram sintetizados pelo método de co-precipitação e submetidos a caracterização físico-química quanto ao tamanho hidrodinâmico, carga superficial, cristalinidade e aos grupamentos químicos presentes. Em relação aos efeitos biológicos, células endoteliais do timo (tEnd.1) foram transfectadas com HDL/inibidor e foram avaliadas quanto: i. viabilidade celular por ensaios de MTT, azul de tripan e iodeto de propídio; ii. eficiência de transfecção por citometria de fluxo e iii. depleção de miR-196b-5p por RT-qPCR. Além disso, larvas de Drosophila melanogaster foram alimentadas com HDL e foram avaliadas quanto a: i. comprometimento da motilidade larval; ii. taxa de pupação; iii. atraso para puparia; iv. letalidade, e V. número de eclosões de adultos. Por fim,
inibidores do tipo LNA foram utilizados para o ensaio de inibição do miR-196b-5p em modelo experimental de ELT, onde foi avaliada a expressão relativa do miR-196b-5p e de seu alvo predito SLC9A6 por RT-qPCR. Resultado: Observamos que as nanopartículas do tipo HDL são estáveis em soluções aquosas e apresentam uma
forma hexagonal regular. O complexo HDL/inibidor mostrou uma eficiência de transfecção de 93% e levou a uma depleção significante do miR-196b-5p 48 h após a transfecção. Não observamos efeitos citotóxicos nas células tEnd.1 em concentrações de até 50 μg/ml, assim como em Drosophilas expostas até 500 μg de HDL. O ensaio funcional in vivo em ratos induzidos ao Status Epilepticus revelou uma depleção significante dos níveis hipocampais do miR196b-5p bem como um aumento significante na expressão relativa do gene alvo SLC9A6. Em conclusão, nossos dados sugerem que o LDH se apresenta como um carreador biocompatível e eficiente para inibidores de miRNA, podendo ser usado como uma ferramenta viável e eficaz em ensaios funcionais de inibição de miRNA.

MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2579081 - DANIEL LEITE GOES GITAI
Interno - 1974414 - OLAGIDE WAGNER DE CASTRO
Externo à Instituição - AXEL HELMUT RULF COFRE - CESMAC