Banca de DEFESA: JULIA DE ANDRADE BRANDÃO
Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.DISCENTE : JULIA DE ANDRADE BRANDÃO
DATA : 30/09/2022
HORA: 09:00
LOCAL: Sala 205 ICF/UFAL
TÍTULO:
Avaliação in vitro de alterações biomecânicas, bioquímicas e moleculares de sinoviócitos semelhantes a fibroblastos humanos (HFLS) infectados pelo vírus Chikungunya
PALAVRAS-CHAVES:
Vírus Chikungunya; HFLS; MFA; Espectroscopia Raman; Alterações biomecânicas
PÁGINAS: 90
RESUMO:
O vírus Chikungunya (CHIKV) é um arbovírus transmitido por mosquitos do gênero Aedes sp., capaz de causar a febre Chikungunya (CHIKF) em sua fase aguda e evoluir para uma Síndrome Reumática Crônica (SRC). Nesta infecção, tem-se o acometimento das articulações sinoviais que apresentam em sua composição os sinoviócitos semelhantes a fibroblastos (FLS). Os FLS, em patologias semelhantes à SRC como a artrite reumatóide (AR), apresentam um perfil agressivo capaz de causar danos teciduais severos no processo inflamatório, processo este que pode ocorrer devido a alterações em propriedades biomecânicas celulares. Diante disso, o presente trabalho objetivou identificar alterações biomecânicas, bioquímicas e moleculares em sinoviócitos semelhantes a fibroblastos humanos (HFLS) após a infecção pelo CHIKV in vitro. Para isso, foi realizada a determinação da MOI por MTT e a confirmação da infecção viral por citometria de fluxo intracelular, RT-PCR e infecção de células Vero E6 com sobrenadante de cultivo de HFLS. Foram avaliadas: alterações morfológicas e o módulo elástico de Young através de microscopia de força atômica (MFA); alterações no citoesqueleto por ensaio de fluorescência com marcação para F-actina; alterações bioquímicas através de espectroscopia Raman; alterações na expressão gênica por RT-qPCR; e quantificação quimiocinas no sobrenadante de cultivo através da metodologia de CBA. Os resultados indicaram que os HFLS foram infectados in vitro, observando-se uma porcentagem de 46,8% de células positivas para o CHIKV após 48h através de citometria de fluxo intracelular, além da identificação do genoma viral no sobrenadante por RT-PCR. A presença de unidades formadoras de placas (PFUs) na monocamada de células Vero E6 infectadas indicou a presença de partículas virais viáveis no sobrenadante dos HFLS. A análise por MFA evidenciou alterações significativas na morfologia celular e as análises de nanoindentação detectaram um aumento de 107,46% no módulo elástico de Young, sugerindo que a infecção pelo CHIKV pode levar a alterações no citoesqueleto. Análise do citoesqueleto por fluorescência indicaram rompimento dos filamentos de F-actina após 12h de infecção. A espectroscopia Raman e a subsequente análise de PCA indicaram uma variância total de 65% entre os HFLS não infectados e os HFLS infectados pelo CHIKV. Além disso, os principais picos alterados estão relacionados a alterações em nucleotídeos, amidas primárias e terciárias, folhas β, lipídeos e colágeno, sendo eles os picos 795, 977, 1031, 1223, 1290, 1444, 1495, 1635, 1660 e 1709 cm-1. A análise de expressão gênica indicou um aumento na expressão dos genes MMP1, VEGFA e UGDH. Além disso, um aumento significativo de IP-10 e uma diminuição de MCP-1 foram observadas no sobrenadante 48h após a infecção viral. Em resumo, os resultados apresentados no presente trabalho auxiliam na elucidação das alterações celulares e moleculares envolvidas na interação CHIKV-HFLS, contribuindo para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para esta arbovirose.
MEMBROS DA BANCA:
Externo ao Programa - 1556562 - ABELARDO SILVA JUNIOR
Interna - 2269479 - CAROLINNE DE SALES MARQUES
Presidente - 1612086 - ENIO JOSE BASSI