Banca de DEFESA: RICARDO BEZERRA COSTA

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RICARDO BEZERRA COSTA
DATA : 21/10/2022
HORA: 14:00
LOCAL: por videoconferência
TÍTULO:

PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E AVALIAÇÃO DE ATIVIDADES ANTITUMORAL, ANTIMICROBIANA E SOBRE PARÂMETROS HEMOSTÁTICOS DAS LECTINAS DE Genipa americana L. (JENIPAPO), Rhizophora mangle L. (MANGUE VERMELHO) E DA PRÓPOLIS VERMELHA DE ALAGOAS

PALAVRAS-CHAVES:

câncer; anticoagulante; antifúngico; proteína; cromatografia

PÁGINAS: 198
RESUMO:

O uso de macromoléculas obtidas de tecidos vegetais apresenta grande potencial econômico e farmacológico e isso se dá em decorrência da presença dos compostos bioativos. Dentre estes, lectinas veem sendo intensamente exploradas devido as diversas ações biotecnológicas que podem ter, destacando-se as atividades antifúngica, anticoagulante e antitumoral. Desse modo, o presente trabalho teve por objetivo purificar, caracterizar e avaliar a atividade antitumoral, antimicrobiana e sobre parâmetros hemostáticos das lectinas de Genipa americana L. (jenipapo), Rhizophora mangle L. (mangue vermelho) e da própolis vermelha de Alagoas. As lectinas foram isoladas inicialmente através de extração em Tris-Hcl 50mM pH 8.0, para sementes e cascas de G. americana), NaCl 0,15M, para sementes de R. mangle, e NaCl 0,15M com com 30 % de etanol para a própolis vermelha. Em seguida, foram feitos fracionamentos salinos com sulfato de amônio e as frações que apresentaram melhor atividade foram submetidas à cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-100), para isolamento das lectinas de casca de G. americana (GaBL); cromatografia de exclusão molecular (Sephacryl S-100) seguida de uma trocadora catiônica (DEAE Sepharose) para a lectina de sementes de G. americana (GaSL); ou cromatografia em coluna de quitina para isolar as lectinas de R. mangle e da própolis vermelha. Através de um único passo cromatográfico foi isolada uma lectina (GaBL) e por meio de SDS-PAGE (10%) foi observado que GaBL apresenta uma massa molecular aproximada de 242,5 kDa. No teste citotóxico GaBL não se mostrou tóxica para linhagens celulares de fibroblastos 3T3 em concentrações abaixo de 50μg/mL. O efeito da lectina na coagulação sanguínea foi avaliado através do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de protrombina (TP). GaBL apresentou atividade anticoagulante somente na via intrínseca, onde o TTPA apresentou-se prolongado. A atividade antitumoral avaliada utilizou as linhagens celulares de câncer de pele humano (A431), melanoma (B16) e carcinoma de células escamosas da língua (SCC9). A proliferação celular e a migração celular foram diminuidas em todas as linhagens avaliadas em contato com 10 µg/ml de GaBL diminuiu a invasão de células SCC9. A apoptose foi maior nas células B16 e SCC9 tratadas com lectina. A regulação positiva de GaBL de E-caderina e supressão de Col1A1 em todas as cepas testadas indicou um menor desenvolvimento de câncer. (A lectina de sementes de G. americana, GaSL, teve sua atividade hemaglutinante (AH) inibida fortemente por ramnose, mas não foi afetada por íons divalentes nem por EDTA. GaSL é classificada como uma lectina termoestável, com uma melhor atividade a uma temperatura abaixo de 80 ° C e na faixa de pH 5,0 a 6,0. Frente as atividade antifúngicas, GaSL quando testada com os fungos Candida albicans, Staphylococcus aureus e Cryptococcus neoformans, mostrou-se inibir todas as cepas fungicas em concentrações abaixo de 12,5 μg/mL.  A lectina de sementes de R. mangle é também termoestável, mas, diferente das demais, foi inibida mais intensamente por arabinose e caseína, teve melhor atividade em pH 8,0 e 9,0 e teve sua AH reduzida em presença de íons Mn²⁺, Mg²⁺ e Ca²⁺, não alterada por EDTA e estimulada em presença de Zn²⁺. A lectina da própolis também foi inibida fortemente por caseína, é termoestável, apresentou melhor AH na faixa de pH 5,0 a 6,0 e foi reduzida em presença de Mn²⁺, Mg²⁺, levemente estimulada por Zn²⁺ e não afetada por EDTA e Ca²⁺. Frente a atividade antifúngica PVAL se mostrou uma promissora ferramenta biotecnológica, quando testada com os fungos Candida albicans, Staphylococcus aureus e Cryptococcus neoformans.  PVAL nas concentrações 12,5 μg/mL foi capaz de inibir fortemente Candida albicans e Staphylococcus aureus e 25 μg/mL Cryptococcus neoformans.  O efeito de PVAL na coagulação sanguínea foi avaliado através do tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPA), tempo de protrombina (TP). Onde PVLA promoveu expressivo prolongamento de TTPA, enquanto que para TP PVAL promoveu forte inibição. Diante Dos dados expostos, podemos destacar que GaBL tem elevado potencial antitumoral contra câncer do trato aero digestivo superior e possue notória atividade homeostática. GaSL e PVAL possui notável atividade antifúngica podendo ser uma promissora ferramenta biotecnológica, tendo esta ultima um importante papel nos processos homeostáticos da coagulação, sendo um forte prolongador da TTPA e inibidor de TP.  E por fim destacamos que todas as lectinas estudadas apresentam características estruturais que favorecem o estudo biotecnológico envolvendo a saúde humana.

MEMBROS DA BANCA:
Externa ao Programa - 1120583 - EDMA CARVALHO DE MIRANDA
Presidente - 2089586 - FRANCIS SOARES GOMES
Interno - 3061390 - LEONARDO BROETTO
Interno - 1653558 - LUCIANO APARECIDO MEIRELES GRILLO
Externa ao Programa - 166.228.474-87 - SONIA SALGUEIRO MACHADO - UFAL