CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DE UM INIBIDOR DE PROTEASE DA LARVA DO INSETO Tribolium castaneum
Tribolium castaneum, inibidor enzimático, caracterização bioquímica, besouro da farinha.
Inibidores de protease são substâncias que possuem a capacidade de regular a ação das proteases, bloqueando sua atividade catalítica. Muitos desses inibidores são produzidos naturalmente pelo organismo visando manter a homeostase. Os inibidores de protease têm sido objeto de estudo devido ao seu potencial biotecnológico no controle de pragas, indústria de alimentos, pesquisa de novos medicamentos e também para aumentar a compreensão dos mecanismos de inibição. O presente trabalho teve o objetivo de investigar a atividade inibitória e as características bioquímicas de um inibidor de protease presente no inseto Tribolium castaneum. A primeira etapa foi identificar em qual fase do ciclo de vida do inseto há uma maior produção do inibidor, depois para aprimorar a pureza da amostra, o extrato foi submetido as técnicas de purificação, como precipitação salina e sistemas aquosos bifásicos e trifásicos. Após a escolha da melhor técnica a amostra foi submetida a ensaios de resistência ao pH e a temperatura, influência de sais metálicos e estabilizantes, também foi testada a ação contra o fungo fitopatogênico Amphobotrys ricini. O estudo revelou a presença do inibidor nas fases de larva, pupa e adulto, com destaque para a fase larval, que demonstrou mais de 40% de atividade inibitória. O método que foi mais eficiente para a redução de contaminantes na amostra foi o sistema aquoso trifásico com isopropanol. A atividade do inibidor permaneceu estável nas temperaturas de 40 a 70º C, mas manteve sua atividade mesmo em altas temperaturas, se manteve estável também em uma ampla faixa de PH (5-10). Além disso, a atividade do inibidor foi influenciada por diferentes sais metálicos e diversos estabilizantes, com BSA e Gelatina potencializando notavelmente a atividade inibitória. Por fim, foi observada uma diminuição da velocidade de crescimento do fungo fitopatogênico Amphobotrys ricini. Estes resultados destacam o uso potencial do inibidor de protease endógeno do inseto T. castaneum, podendo também contribuir para a compreensão das propriedades dos inibidores de insetos e mecanismos de regulação enzimática.