NEXT GENERATION SEQUENCING NA DETERMINAÇÃO DA DIVERSIDADE DE BADNAVÍRUS QUE INFECTAM FLORES TROPICAIS NA REGIÃO NORDESTE
Caulimoviridae, Zingiberales, sequenciamento NGS
Um dos segmentos mais promissores do agronegócio nacional é a floricultura, com um mercado emergente de lucratividade em todo o mundo. As flores tropicais são atacadas por diferentes patógenos, dentre eles citam-se as badnaviroses. Os badnavírus (Família Caulimoviridae) consistem em um grupo de vírus com genoma de DNA circular fita dupla, encapsidados em partículas baciliformes não envelopados, e transmitidos principalmente por cochonilhas. Doenças causadas por vírus deste gênero têm emergido como sérios problemas para muitas culturas economicamente importantes nas regiões tropicais e subtropicais do mundo, incluindo o Brasil. Para caracterizar espécies de badnavírus que ocorrem em plantas tropicais das famílias Cannaceae, Heliconiaceae, e Zingiberaceae amostras foram coletadas nos polos produtores de plantas tropicais em Alagoas, Pernambuco e Ceará. Submetidas a detecção de badnavírus via PCR (“Polymerase Chain Reaction”) usando os primers universais para o gênero, doze amostras Costus spirales verde (6), Alpinia rosa (4) e Helicônia Kinwi (2) foram positivas, posteriormente essas amostras foram submetidos à amplificação do genoma viral completo via Rolling circle amplification (RCA) utilizando o kit TempliphiTM 100 amplification (GE Healthcare Life Sciences) e novamente submetidas a reação pode PRC para detectar a ocorrência de infecção por badnavírus na forma epissomal. Uma vez identificadas as amostras infectadas com o vírus na forma epissomal os produtos de RCA foram selecionados e serão sequenciados por NGS. As sequências dos genomas virais completos serão montadas e submetidas à análise BLASTn e análises de comparações pareadas no programa SDT para demarcação de espécies. Para confirmar a presença da infecção pelas espécies identificadas por NGS e assegurar a eficiência e confiabilidade do método, primers de PCR específicos para cada vírus serão desenhados para obtenção do genoma completo via sequenciamento por primer walking.